Как приготовить микропрепарат

В продаже имеется множество наборов готовых микропрепаратов по ботанике, зоологии, биологии, анатомии и вам остается только выбрать. Такие препараты представляют собой предметное стекло с объектом исследования, закрытым покровным стеклом. Они полностью готовы для исследования в проходящем свете. Выбор готовых препаратов огромный, да и написано о них тоже немало. Главный плюс заключается в том, что они готовы к исследованиям и самим готовить ничего не нужно - купили и изучайте.

Несмотря на простоту и удобство таких препаратов, рано или поздно может наступить момент, когда изучать их станет скучно, и вы захотите исследовать именно то, что интересно вам и прямо сейчас. Или вы захотите внести в исследование что-нибудь свое, личное. Значит придется изготавливать препараты самостоятельно. Но к этому нужно быть готовым, запастись терпением, быть очень аккуратным и тогда все получится.

Сам принцип исследования в проходящем свете подразумевает минимально возможную толщину образца. Даже кожица луковки, которая на взгляд кажется невесомой и не имеющей толщины, в микроскоп воспринимается как очень толстый и трехмерный объект. (Прочитайте еще раз статью «Крутим ручки, смотрим вглубь»). Поэтому делаются очень тонкие срезы образцов. Для их изготовления нужно «набивать руку» чтобы получать срезы толщиной в несколько клеточных слоёв, ведь только в этом случае можно увидеть отчетливое изображение клеток, в отличие от толстых образцов, дающих нечеткое и расплывчатое изображение.

Итак, что вам потребуется? 

• Предметные стекла.
• Покровные стекла.
• Пипетка.
• Пинцет.
• Пчелиный воск или вазелин.
• Парафин.
• Инструмент микротом.
• Бритвенные лезвия из нержавеющей стали.
• Инструмент препарировальная игла.
• Инструмент микробиологическая петля.
• Перчатки медицинские.
• Фильтровальная бумага.
• Безворсовые салфетки.

	Предметные и покровные стекла.
	Микрото́м - специальный инструмент для изготовления тонких срезов. С помощью специальных, профессиональных микротомов получают срезы с кусочков органов или тканей толщиной до 0,1 микрометра (0,0001 мм) или еще тоньше. Простым же микротомом с бритвенным лезвием, как на этой иллюстрации, при определенной сноровке можно получить срезы толщиной в несколько десятков микрометров. Такой микротом часто входит в комплект в комплект к учебным микроскопам, например к Микромед Эврика 40х-400х и 40х-1280х.
	Препарировальная игла незаменима для переноса среза с микротома на предметное стекло. Также с помощью такой иглы удобно расправлять срезы перед тем, как накрыть их покровным стеклом.
	Микробиологическая петля используется для взятия, переноса, посева и других манипуляций с малыми количествами исследуемого материала.

При приготовлении препарата всегда соблюдайте простые правила:

• Всегда берите и удерживайте предметные и покровные стекла только за грани.
• Обязательно пользуйтесь медицинскими перчатками - отпечатки пальцев на стекле сильно ухудшают изображение.
• Следите за чистотой предметных и покровных стекол. Загрязнения, пыль и влага на стеклах могут также ухудшить изображение и разочаровать вас.

Приготовление временных препаратов.

• Положите предметное стекло на чистую поверхность.
• На середину стекла поместите образец. В зависимости от его вида используйте для этого пинцет или микробиологическую петлю.
• Если вы исследуете срез, расправьте его с помощью препарировальной иглы.
• Аккуратно опустите на образец покровное стекло. Сначала нужно опустить один край, затем осторожно опустить все стекло. При необходимости можно очень легко надавить на него обратной стороной препарировальной иглы.
• Если вы исследуете жидкость, то с помощью чистой и сухой пипетки аккуратно нанесите на середину предметного стекла одну каплю жидкости. Покровное стекло нужно поставить под углом рядом с нанесенной каплей. Перемещениями покровного стекла вперед – назад добейтесь соприкосновения жидкости со всей нижней поверхностью. Затем стекло постепенно опустите, так, чтобы под ним не осталось пузырьков воздуха. Если жидкости слишком много, то стекло может «поплыть». Излишек жидкости в этом случае нужно втянуть фильтровальной бумагой.
• Если вы исследуете образцы, которые не могут обходиться без воды, например, живые микроорганизмы, то действовать нужно так же, как и при исследовании жидкостей. Сначала с помощью пипетки, нужно поместить одну или две капли дистиллированной воды в центр стекла. Затем следует поместить в воду образец и накрыть его покровным стеклом как написано выше.

Временный препарат готов. Теперь его можно осторожно положить на предметный столик микроскопа и приступать к изучению.

Для исследования жидкостей можно использовать и предметное стекло с лункой. Такое стекло имеет углубление, специально предназначенное для размещения жидкости. С помощью пипетки поместите в углубление две-три капли жидкости и накройте покровным стеклом. Следите за тем, чтобы в углублении не оказалось лишней жидкости - она может выйти наружу и навредить результатам. Если все-таки жидкость выйдет за покровное стекло ее можно убрать с помощью фильтровальной бумаги или бумажной салфетки.

Подобные препараты живут недолго, поэтому они и называются временными - исследовать их нужно быстро, иначе препарат, особенно мокрый, просто высохнет.

Приготовление постоянных препаратов.

Для того, чтобы препарат мог сохраняться длительное время, необходимо загерметизировать пространство в котором находиться образец.

Если такой препарат приготовлен аккуратно, то он может сохраняться очень долго. Для такого препарата потребуется пчелиный воск. Проведите последовательно гранями покровного стекла по ровному брусочку воска. За счет этого на краях стекла возникнут бортики. Закройте образец, как написано выше. Слегка прижмите стекло. Края покровного стекла со всех сторон приклеятся к предметному стеклу и между стеклами образуется недоступное для воздуха пространство. Вместо воска можно использовать вазелин, но воск обеспечивает лучшую герметизацию и сохранность образца. Слегка разогретым воском можно сделать дополнительную окантовку стекол, и добиться еще лучшей сохранности препарата.

Окрашивание препаратов.

Не всякие препараты могут наблюдаться в световой микроскоп достаточно отчетливо и контрастно, например микробы увидеть отчетливо может получится не всегда. Кроме того, за счет химического взаимодействия между разными веществами образца и красителем могут быть контрастно выделены детали и структуры невидимые при исследовании неокрашенного препарата. Начинающим исследователям можно попробовать начинать окрашивание с помощью таких простых веществ, имеющихся в каждом доме, как раствор йода и зеленки.

Раствор йода вообще очень универсальный краситель, им можно окрашивать множество биологических препаратов.

В качестве примера фото среза картофеля, окрашенного в слабом растворе йода.

Буквально через 2-3 минуты йод проявил частицы крахмала, невидимые без окрашивания.

Срез картофеля с увеличением 400х.
На левом фото – неокрашенный образец, на правом – тот же образец, окрашенный йодом.

Когда вы будете получать отличные результаты с йодом, покупайте специальные красители, например, азур и эозин и двигайтесь в ваших исследованиях еще дальше.

Случаются ситуации, когда у вас хорошо получился влажный микропрепарат и разбирать его жалко, но окрасить хочется. Как поступить? Разместите у одного края покровного стекла фильтровальную бумагу, а с другого края нанесите каплю красителя. Салфетка начнет вытягивать воду из-под стекла и затягивать под него краситель - образец будет окрашиваться. Не стоит забывать, что для изучения микроорганизмов нужно всегда использовать не ядовитые красители. Только так возможно изучать живые и окрашенные микроорганизмы.